RSAU-MTAA
Electronic Library

     

Details

Title: Разработка ПЦР-тестов для идентификации калифорнийской щитовки Diaspidiotus perniciosus (Hemiptera: Diaspididae) = Development of PCR tests for the identification of Diaspidiotus perniciosus (Hemiptera: Diaspididae) // Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии / Izvestiya of Timiryazev Agricultural Academy: Научно-теоретический журнал Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К.А. Тимирязева. – 2025. – Вып. 5
Creators: Шипулин Андрей Владимирович
Imprint: Москва: РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева, 2025
Collection: Журнал «Известия ТСХА»
Subjects: ЗЕМЛЕДЕЛИЕ — РАСТЕНИЕВОДСТВО — ЗАЩИТА РАСТЕНИЙ; Защита растений; карантин растений; вредители плодовых культур; энтомология; диагностика; ПЦР; Plant protection; plant quarantine; fruit crop pests; entomology; diagnostics; PCR
UDC: 632.752.3
Document type: Article, report
File type: PDF
Language: Russian
DOI: 10.26897/0021-342X-2025-5-83-96
Rights: Свободный доступ из сети Интернет (чтение, печать, копирование)
Additionally: New arrival; All documents
Record key: RU/ЦНБ имени Н.И. Железнова/EPERIODIKA/EPERIODIKA-20251105-80858

Allowed Actions: Read Download (5.9 Mb)

Group: Anonymous

Network: Internet

Annotation

Калифорнийская щитовка Diaspidiotus (Quadraspidiotus) perniciosus (Comstock, 1881) относится к числу экономически значимых вредителей плодовых культур, регулируется Единым перечнем карантинных объектов Евразийского экономического союза. В карантинных фитосанитарных лабораториях диагностика этого вида проводится морфологическими методами, тогда как ПЦР-тесты в отношении калифорнийской щитовки не применяются. Статья посвящена разработке ПЦР-тестов для идентификации D. perniciosus на основе видоспецифичных праймеров Dp1-F/Dp1-R, которые позволяют получить ампликон размером 216 п.н., и зонда Dp1-probe для участка митохондриального гена COI. Тестирование пары праймеров и зонда in silico показало их видоспецифичность в отношении D. perniciosus. Были предложены три ПЦР-теста: 1) с электрофоретической детекцией ПЦР-продуктов; 2) в «реальном времени» с интеркалирующим красителем Sybr Green I; 3) в «реальном времени» с использованием «TaqMan» зонда. Апробация была проведена на образцах ДНК D. perniciosus и 15 видов Diaspididae, в том числе 8 видов рода Diaspidiotus. Во всех трех тестах положительный результат был зафиксирован только в случае целевого объекта, то есть показана специфич- ность предложенных методов идентификации. Аналитическая чувствительность каждого из трех ПЦР-тестов при испытании образцов D. perniciosus с концентрацией ДНК в диапазоне от 0,1 до 40,4 нг/мкл была равной 100%. Таким образом, ПЦР-тесты позволяют детектировать ДНК целевого объекта при ее минимальной концентрации. Разработанные ПЦР-тесты могут быть рекомендованы к применению для обеспечения карантинных фитосанитарных мер в лабораторной практике при идентификации калифорнийской щитовки, в том числе на преимагинальных стадиях. Выбор того или иного теста определяется оснащенностью лаборатории. //The San Jose scale, Diaspidiotus (Quadraspidiotus) perniciosus (Comstock, 1881), is a significant economic pest of fruit crops regulated under the Common List of Quarantine Pests of the Eurasian Economic Union. In quarantine phytosanitary laboratories, diagnosis of this species is typically performed using morphological methods; PCR teats for D. perniciosus are not routinely employed. This article describes the development of PCR tests for the identification of D. perniciosus based on speciesspecific primers Dp1-F/Dp1-R, which amplify a 216 bp amplicon, and a Dp1-probe targeting a region of the mitochondrial COI gene. In silico testing of the primer pair and probe demonstrated their species specificity for D. perniciosus. Three PCR tests were developed: 1) with electrophoretic detection of PCR products; 2) a real-time PCR with the intercalating dye Sybr Green I; and 3) a real-time PCR using a TaqMan probe. They were tested on DNA samples of D. perniciosus and 15 other Diaspididae species, including eight species of the genus Diaspidiotus. In all three tests, a positive result was only obtained for the target species, demonstrating the specificity of the proposed identification methods. The analytical sensitivity of each of the three PCR tests, when tested on D. perniciosus DNA samples with concentrations ranging from 0.1 to 40.4 ng/μL, was 100%, indicating that the PCR tests can detect the target DNA at its minimum concentration. The developed PCR tests can be recommended for use in quarantine phytosanitary measures in laboratory practice for the identification of D. perniciosus, including at pre-imaginal stages; the choice of a test depends on the available laboratory equipment.

Document access rights

Network User group Action
RSAU-MTAA CSL Local Network All Read Print Download
-> Internet All Read Print Download

Usage statistics

stat Access count: 0
Last 30 days: 0
Detailed usage statistics